肺炎鏈球菌抗原檢測試劑盒（膠體金法）使用說明書

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【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：肺炎鏈球菌抗原檢測試劑盒（膠體金法）

商品名稱：Binax NOW^® Streptococcus pneumoniae Test

【包裝規(guī)格】22人份/盒。

【預期用途】

肺炎鏈球菌抗原檢測試劑盒（膠體金法）是一種體外快速免疫層析（ICT）試驗，用于檢測肺炎病人尿液和腦膜炎病人腦脊液（CSF）中的肺炎鏈球菌抗原，與培養(yǎng)等其他方法結(jié)合，用于肺炎球菌性肺炎和肺炎球菌性腦膜炎的輔助診斷。

肺炎鏈球菌是社區(qū)獲得性肺炎的主因，并且可能是不明原因社區(qū)獲得性肺炎的重要致病原^{1, 2}。肺炎球菌性肺炎的病死率高達30%，這取決于菌血癥、年齡和潛在性疾病^{1, 3}。如果未得到正確診斷和治療，肺炎鏈球菌感染可導致菌血癥、腦膜炎、心包炎、膿胸、暴發(fā)性紫癜、心內(nèi)膜炎和/或關(guān)節(jié)炎^{4, 5}。

肺炎球菌性腦膜炎常導致不可逆轉(zhuǎn)的腦損傷或腦死亡，它既可作為其他肺炎球菌感染的并發(fā)癥出現(xiàn)，也可單獨出現(xiàn)⁶。各個年齡段人群均可感染，但更常見于5歲以下兒童、青少年和老年人⁷。病程進展快速，數(shù)小時內(nèi)可從輕度疾病轉(zhuǎn)為昏迷，這就使得即刻做出診斷，立即動用抗菌素進行治療顯得尤為重要。盡管采用了適當?shù)目股刂委煄滋旌筮€是會有20%-30%的肺炎球菌性腦膜炎病人會死掉⁶。病死率在小兒和高齡病人中甚至更高⁶。

Binax NOW^®肺炎鏈球菌抗原檢測試劑盒（膠體金法）為肺炎球菌性肺炎的診斷提供了一種簡便快速的診斷方法，該方法所用檢測樣品為尿液，尿液的收集、貯存和運輸都非常方便，該實驗通過對腦脊液進行檢測也可對肺炎球菌性腦膜炎做出及時高度準確的診斷。 

【檢驗原理】

肺炎鏈球菌抗原檢測試劑盒（膠體金法）是一種薄膜免疫層析試驗，用于檢測人類尿液和腦脊液中肺炎球菌的可溶性抗原。兔抗肺炎鏈球菌抗體被吸附到硝酸纖維素膜上作為樣本線，對照抗體作為另一條線吸附到同一膜上。結(jié)合有可視粒子的兔抗肺炎鏈球菌抗體和抗種抗體干燥結(jié)合到惰性纖維支持物上，形成的結(jié)合物墊和帶條紋的膜結(jié)合到一起組成檢測條。檢測條和放拭子標本的孔位于一個書形鉸鏈狀檢測卡的兩側(cè)。 

試驗時，將拭子浸入標本中（尿液或腦脊液），取出，然后插入檢測卡中，從滴瓶中加入A試劑（一種緩沖液），將檢測卡閉合，使樣本和檢測條相觸。樣本中存在的肺炎球菌抗原與抗肺炎鏈球菌抗體結(jié)合物結(jié)合，形成的抗原結(jié)合物復合物被固定的抗肺炎鏈球菌抗體捕獲，形成樣本線。固定的對照抗體捕獲種屬抗體結(jié)合物，形成對照線。 

試驗結(jié)果可通過紫紅色線的出現(xiàn)與否來解釋。陽性結(jié)果（取決于標本中存在的抗原濃度）在15分鐘讀數(shù)時，會檢測出樣本線和對照線。陰性結(jié)果，15分鐘讀數(shù)時只出現(xiàn)對照線，表示標本中未檢測到肺炎鏈球菌抗原。如果對照線未出現(xiàn)，不管標本線出現(xiàn)與否，都視為無效結(jié)果。

【主要組成成分】

 = 1 \* GB3 ① 檢測卡       包被有純化的兔抗肺炎鏈球菌C-多糖抗體、用專門方法結(jié)合到抗肺炎鏈球菌抗體上的膠體金粒子、雞IgY、用專門方法結(jié)合到驢抗雞抗體上的膠體金粒子

 = 2 \* GB3 ② A試劑        枸椽酸鹽/帶有十二烷基磺酸鈉的磷酸鹽緩沖液，吐溫^®20，疊氮鈉。 

 = 3 \* GB3 ③ 樣本拭子     于Binax NOW^®肺炎鏈球菌抗原檢測試劑盒（膠體金法）（不接觸人體，用于蘸取已經(jīng)采集好的尿液或腦脊液）。不要使用其他拭子。

 = 4 \* GB3 ④ 陽性對照拭子  加熱滅活的肺炎鏈球菌抗原干燥結(jié)合到拭子上

 = 5 \* GB3 ⑤ 陰性對照拭子  肺炎鏈球菌陰性拭子

【儲存條件及有效期】

試劑盒儲存于2-30℃，有效期為24個月。

【樣本要求】

在做Binax NOW^®肺炎鏈球菌抗原檢測試劑盒（膠體金法）前，將所有標本平衡至室溫（15-30℃）。測試前，要將標本輕輕旋勻。 

尿液（用于肺炎診斷）

將尿液收集在標準容器中。收集后，如果24小時內(nèi)測定，室溫保存（15-30℃）。此外，將尿液在2-8℃保存或冷凍保存，可存放14天。硼酸可用作防腐劑。

必要時，可將尿液標本用防漏容器在2-8℃或冷凍條件下運送。 

腦脊液（用于腦膜炎診斷）

根據(jù)標準程序收集腦脊液，測試前腦脊液在室溫（15-30℃）只能貯存24小時。冷藏（2-8℃）或冷凍（-20℃）可貯存至1周。 

【檢驗方法】

檢測肺炎球菌肺炎時用尿液標本，檢測肺炎球菌性腦膜炎時用腦脊液標本。

注：測試液性標本時用3滴A試劑。

1．   將病人標本和/或液狀對照品放至室溫（15-30℃），輕輕混勻。測試前從包裝袋中取出檢測卡平放。

2．   將1根Binax樣本拭子浸入要測試的標本中，*浸沒拭子頭。如果拭子有滴水，將拭子靠在收集容器的邊上，排去多余的液體。

3．   檢測卡內(nèi)部的右手邊有兩個孔，將拭子插入底部的孔中（拭子孔），穩(wěn)步向前推，使整個拭子頭在上部的孔中可見，不要取出拭子。

4．   垂直持放A試劑瓶，高出檢測卡上方1/2到1英寸，慢慢向底部的孔中加入3滴A試劑。

5．   立即從檢測卡的右緣揭去粘附襯，封閉檢測卡，過15分鐘在窗口判讀結(jié)果。15分鐘后讀取的結(jié)果可能不準確。然而，有些陽性病人不到15分鐘就出現(xiàn)可見樣品線。

注意：只能使用本試劑盒提供的樣本拭子，不要使用其它拭子。為方便起見，在拭子柄上做了切痕，在閉合檢測卡時可能會將拭子柄折斷。操作時不要使拭子柄從孔中脫出。

【檢驗結(jié)果的解釋】

由于本研究是回顧性的，進行測試的各種感染病人的數(shù)量是有限的，且各人的病史不祥，因此，不能排除存在肺炎鏈球菌混合感染的情況。當用純培養(yǎng)進行測試時（資料如下），這些微生物在NOW^®試驗中均未產(chǎn)生交叉反應性。 

全微生物檢測

為了確定Binax NOW^®試驗的分析特異性，收集了144份交叉反應物，包括與肺炎有關(guān)的微生物和那些可能作為正常菌群在泌尿生殖道發(fā)現(xiàn)的微生物，以及引起尿道感染的微生物。所有微生物都在10⁶到10⁹CFU/ml用Binax NOW^®試驗進行了評估，在144例微生物中有143例無交叉反應性，*陽性的微生物是緩和鏈球菌，由于它和Binax NOW^®試驗有共同抗原，交叉反應是可預期的。緩和鏈球菌與心內(nèi)膜炎有關(guān)，而非肺炎，不可能頻繁出現(xiàn)在NOW^®試驗測試人群中⁸。下列生物經(jīng)過測試且結(jié)果為陰性。當檢測出不止一株時，用數(shù)字列在括號內(nèi)。 

不動桿菌（4）莢膜組織胞漿菌*（2）普通變形桿菌（2）

腺病毒*產(chǎn)酸克雷白菌 （2）斯氏普羅威登斯菌 糞產(chǎn)堿桿菌

肺炎克雷白菌（3）假單胞菌屬 （7）乳酸桿菌 （5）

呼吸道合胞病毒* 皮炎芽生菌*  嗜肺軍團菌 鼻病毒*

百日咳鮑特菌  產(chǎn)單核細胞李斯特菌  沙門菌 （4）卡他布蘭漢菌

Luteus細球菌 （2）黏質(zhì)沙雷氏菌 白色假絲酵母菌 （3）奧斯陸莫拉菌

鞘胺醇桿菌屬 multivorum 星形假絲酵母菌 摩根菌 金黃色葡萄球菌

厭氧球孢子菌* 堪薩斯分枝桿菌 葡萄球菌 （8）棒狀桿菌屬 （3）

結(jié)核分枝桿菌  寡養(yǎng)單胞菌屬 陰溝腸桿菌 （4）

支原體* （3）咽頰鏈球菌 ◊● avium腸球菌◊ 灰色奈瑟氏菌

牛鏈球菌 ◊ durans腸球菌◊ 淋病奈瑟氏菌

A群鏈球菌● 糞腸球菌 ◊ lactamica奈瑟氏菌 B群鏈球菌◊●

（8）大腸埃希氏菌 （8）腦膜炎奈瑟氏菌 C群鏈球菌◊●

Escherichia hemannii （2）多糖奈瑟菌  F群鏈球菌◊● 黃桿菌屬

（2）淺黃色奈瑟氏菌 G群鏈球菌◊●  陰道加德鈉氏菌  諾卡菌屬*

變異鏈球菌 ◊● 流感嗜血桿菌  （10）巴西副球孢子菌*

副血鏈球菌 ◊● 副流感病毒 *  （2）

血鏈球菌◊● 副流感暑血桿菌（2）

陰道毛滴蟲（2）

*來自CDC的純培養(yǎng)，據(jù)認定為高濃度。

◊非A非B鏈球菌（總株數(shù)是16）

●非D群鏈球菌（總株數(shù)是17）

全微生物檢測

除了在前瞻性研究中遇室的細菌和病毒感染， Binax搜集了一組潛在交叉反應物，包括zui常見的細菌性和病毒性腦膜炎致病因子，在 Binax NOW^®試驗中對濃度范圍從10⁷到10⁸CFU/ml的所有細菌進行了評估，對病毒在大于或等于10⁵I.U./ml水平進行了測試。 Binax NOW^®試驗顯示的特異性是100%，所有參加測試的病毒和細菌產(chǎn)生的結(jié)果均為陰性。

Burkitt^,s 淋巴瘤（Epstein Barr）     嗜血桿菌

柯薩奇A7病毒                非典型（35891）

柯薩奇B3病毒                單純皰疹病毒1型

?？刹《?、                   單純皰疹病毒2型

糞腸球菌                     產(chǎn)單核細胞李斯特菌（19115）

A群流感嗜血桿菌             產(chǎn)單核細胞李斯特菌（19424）

B群流感嗜血桿菌             腦膜炎奈瑟氏菌A血清型

C群流感嗜血桿菌           0  腦膜炎奈瑟氏菌B血清型

D群流感嗜血桿菌             腦膜炎奈瑟氏菌C血清型

E群流感嗜血桿菌             腦膜炎奈瑟氏菌D血清型

F群流感嗜血桿菌             腦膜炎奈瑟氏菌L血清型

流感嗜血桿菌                 口腔鏈球菌（35037）

非典型（51997） 

干擾物質(zhì)

有較高白細胞（1×10⁴細胞/ml），紅細胞（30細胞/μl）蛋白（3g/dl），膽紅素（100μg/ ml）的腦脊液標本用Binax NOW^®肺炎鏈球菌檢測試驗進行評價，未發(fā)現(xiàn)對試驗性能有影響。 

重復性研究

分別在3家實驗室對一組包括陰性、弱陽性、陽性樣本的標本單盲編號，用 Binax NOW^®肺炎鏈球菌檢測試驗進行單盲研究。3天中對每一樣本進行多次測定。270份樣本100%得到了預期結(jié)果。

【注意事項】

對照拭子需要加6滴A液，病人標本需要加3滴A液。

1．  無效結(jié)果，無對照線出現(xiàn)，A液加量不足時會出現(xiàn)。一定要加入足夠量液體，將小瓶垂直持于拭子孔上方1/2-1英寸處，慢慢滴加，使液體自由落下。

2．  僅供體外診斷用。

3．  檢測卡密封在包裝袋中，如果包裝破損或開封，請不要使用。用前從包中取出檢測卡，不要觸摸檢測卡的反應區(qū)。

4．  不要使用過期試劑。

5．  不要將不同批號試劑混合使用。

6．  使用試劑盒中提供的拭子。不要使用其他拭子。

7．  盡管制備對照拭子的溶液用標準方法進行了滅活，病人樣本、對照品和檢測卡仍應視為能傳播疾病的物質(zhì)，遵照已建立的預防微生物危害的措施做適當處理。

8．  此試驗所用尿液標本不要求必須是清潔的，因此，用于該試驗的標本可能不適于做細菌培養(yǎng)。

9．  一旦拭子浸入腦脊液標本中，樣本不再是無菌的，可能不再適于做細菌培養(yǎng)。如果腦脊液標本要做培養(yǎng)，要么先做培養(yǎng)，要么將腦脊液標本分開。

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【公司名稱】 廣州健侖生物科技有限公司
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