腦膜炎慢生長診斷血清群

廣州健侖生物科技有限公司

【儲藏條件】

2~8℃避光保存，在標(biāo)明的有效期內(nèi)使用。

【有效期】

24個月

【產(chǎn)品名稱】

通用名：腦膜炎奈瑟菌診斷血清英文名：antisera for N.meningitidis

【產(chǎn)品說明】

本套血清用于A、B、C、W、X、Y等6個常見血清QUN（serogroup）腦膜炎奈瑟菌的血清群鑒定，將相應(yīng)血清群腦膜炎奈瑟菌制備滅活抗原，免疫家兔所得，血清產(chǎn)品經(jīng)免疫吸附去除了非特異性凝集成分，具有效價高，特異性強的特點。

腦膜炎慢生長診斷血清群

【規(guī)格】

每種血清群1瓶，每瓶2ml，均為使用液。

【使用方法】

1.產(chǎn)品在使用前，由冰箱拿出，恢復(fù)溫度到室溫后使用。

2.樣品分離培養(yǎng)物，經(jīng)鏡檢和生化鑒定，確定為腦膜炎奈瑟菌后，再進(jìn)行血清分群檢測，如果未能確定為腦膜炎奈瑟菌，不宜直接進(jìn)行血清凝集檢測，以免產(chǎn)生假陽性結(jié)果。

3.待鑒定細(xì)菌在血平板或巧克力平板上，5% CO₂，培養(yǎng)48小時。

4.用酒精擦拭玻璃片。

5.用蠟筆或防水筆將玻璃片分為8個方格。

6. 在玻片每個方格的下半部分，用移液器加5%的福爾馬林溶液（基于生物安全目的）。

7. 用無菌或一次性10μl接種環(huán)挑取BAP平板上過夜培養(yǎng)的細(xì)菌菌落。

8. 在玻片上將細(xì)菌與5%的福爾馬林溶液混勻，混勻后的液體應(yīng)該不透明，在加抗血清前應(yīng)保持細(xì)菌懸液不干燥。

9. 在玻片的上方加10μl血清群特異的抗血清，同時在陰性對照側(cè)加BS或者生理鹽水。

10. 緩慢的混合細(xì)菌懸液和抗血清，使上部的抗血清和下部的細(xì)菌懸液充分混合1-2分鐘。不要做旋轉(zhuǎn)晃動，以免不同血清群的血清會相互混合污染。

11.在燈光下，黑暗背景條件下觀察結(jié)果。1-2分鐘內(nèi)呈2+及以上凝集現(xiàn)象為陽性，1-2分鐘內(nèi)呈現(xiàn)2+以下凝集現(xiàn)象為陰性。如果過了2分鐘，才發(fā)生的凝集反應(yīng)按陰性處理。

【凝集反應(yīng)的強度等級】

當(dāng)抗血清與細(xì)菌接觸，會引起凝集反應(yīng)，使細(xì)胞（細(xì)菌）凝集或呈簇，細(xì)胞（細(xì)菌）上清液變得清亮，細(xì)胞懸液濃度或使用的抗血清濃度不同，會產(chǎn)生不同的強度的凝集反應(yīng)，見圖示

4+ 所有的細(xì)胞都發(fā)生凝集，細(xì)胞懸液清亮。

3+ 75%的細(xì)胞發(fā)生凝集，細(xì)胞上清略微渾濁不清。

2+ 50%的細(xì)胞發(fā)生凝集，細(xì)胞上清略微渾濁不清。

1+ 25%的細(xì)胞發(fā)生凝集，細(xì)胞上清略微渾濁不清。

+/- 少于25%的細(xì)胞發(fā)生凝集，可見有顆粒狀的成分。

0 沒有肉眼可見的凝集，上清懸液渾濁、平滑。

【血清群確定】

1. 1-2分鐘內(nèi)，出現(xiàn)3+或4+凝集為陽性反應(yīng)（強陽性反應(yīng)）。對于B群腦膜炎奈瑟菌來說，如果出現(xiàn)2+及以上的凝集則可認(rèn)為陽性。

2. 陰性反應(yīng)是+/-、1+ 或 2+（弱凝集）的凝集程度。

3. 當(dāng)菌株僅與一種抗血清出現(xiàn)凝集，但和生理鹽水不凝集時才能鑒定為該種血清型。

4. 如果不能確定血清群，菌株記為不能分群腦膜炎奈瑟菌（NG）。

5. 關(guān)于不能分群腦膜炎奈瑟菌（NG）菌株。

6. 在生理鹽水中凝集，無論與任何抗血清發(fā)生強反應(yīng)，都應(yīng)標(biāo)記為自凝菌。

7. 在生理鹽水中不自凝，和多種血清出現(xiàn)凝集，記為NG。

8. 不和生理鹽水凝集，也不和任何一個血清凝集也記作NG。

【結(jié)果難以判斷時解決方案】

腦膜炎奈瑟菌具有可變性（有莢膜與無莢膜，小菌落與大菌落，慢生長與快生長，強凝集與弱凝集），有時候很難清除解釋結(jié)果，一些建議如下：

1. 挑取同一平板上的另一個細(xì)菌克隆進(jìn)行重復(fù)凝集試驗。

2. 如果玻片上的結(jié)果不明確，將試管中配置懸液，重復(fù)該試驗。

3. 加20µl抗血清直接涂于玻片上，直接加一環(huán)細(xì)菌進(jìn)行混均凝集。

4. 再次培養(yǎng)，第二天進(jìn)行重新試驗。

5. 如果當(dāng)天的平板上有各種大小不一的菌落，每種菌落再次分離純培養(yǎng)，第二天每種菌落進(jìn)行試驗。大菌落一般會有比較好的凝集反應(yīng)，小菌落次之。

6. 如果試驗中的問題還是不能解決，應(yīng)當(dāng)和對照菌株同時進(jìn)行試驗，確保試劑的正確性。

【血清質(zhì)量控制】

在對未知的菌落進(jìn)行血清分群之前，應(yīng)選用一套腦膜炎奈瑟菌參考菌株（A, B, C, W, X, Y）和一株可分群的腦膜炎奈瑟菌進(jìn)行質(zhì)量控制檢測。操作步驟：

1. 新購進(jìn)的每一批次抗血清要用參考菌株進(jìn)行檢測。

2. 半年后重復(fù)質(zhì)量控制檢測

3. 如果血清管暴露于超過4℃環(huán)境，或者懷疑血清被污染時，也要對血清進(jìn)行重新的質(zhì)量控制。

4. 關(guān)于血清分群和質(zhì)量控制，每一批次的抗血清需要使用所有的參考菌株進(jìn)行實驗室驗證，記錄質(zhì)量控制驗證結(jié)果。

【血清質(zhì)量控制檢測結(jié)果判讀】

1. 通過質(zhì)量控制檢測

與同源性的抗原反應(yīng)，1-2分鐘內(nèi)，出現(xiàn)3+或 4+程度的凝集；單一血清群的抗血清不與其他血清群的腦膜炎奈瑟菌反應(yīng)，不與NG菌株凝集反應(yīng)，鹽水不自凝。

2. 分群血清質(zhì)量控制檢測失敗

如果抗血清與一種或多種參考菌株凝集反應(yīng)，或/和NG參考菌株反應(yīng)，鹽水自凝，則血清不能使用。

【其他所需材料】

潔凈玻片、生理鹽水（0.85%的氯化鈉溶液）、5%的福爾馬林溶液、接種環(huán)或移液器。

【注意事項】

1. 本產(chǎn)品只能作為腦膜炎奈瑟菌血清型判定的輔助方法，zui終的判定需形態(tài)學(xué)、生化方法和血清學(xué)方法共同進(jìn)行。

 2. 本產(chǎn)品應(yīng)避免冷凍。反復(fù)凍融會使血清產(chǎn)生沉淀。

3. 本產(chǎn)品在保存過程中可能會產(chǎn)生渾濁或沉淀，這并不表示該產(chǎn)品已被污染。離心或者過膜去掉渾濁或沉淀后，可以正常使用。

4. 本產(chǎn)品含有0.1%*作為防腐劑，丟棄時需倒入下水管，并用大量的水沖洗下水管。

廣州健侖生物公司提供SSI血清產(chǎn)品，包括沙門氏菌，志賀氏菌，大腸桿菌，肺炎鏈球菌，嗜血桿菌等。并且提供德國有名血清品牌SiFin的核心血清產(chǎn)品，德國SiFin血清質(zhì)量好，實驗*，已被各高校實驗室，研究所列為推薦血清產(chǎn)品！詳情可咨詢工作人員！

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4.    可用ELISA、RIA及乳膠凝集等試驗檢測標(biāo)本中該菌特異

性抗原或用PCR技術(shù)檢查該菌核酸進(jìn)行快速診斷。[1]  核酸擴(kuò)增

技術(shù)，即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chainreaction，PCR）

，其基本原理是設(shè)計、合成兩條寡核苷酸，作為引物，對應(yīng)于待

測病原微生物某一段特異性序列的兩端，然后在體外模擬DNA體內(nèi)

復(fù)制的過程反復(fù)擴(kuò)增，使靶序列放大上萬倍甚至上百萬倍而被檢

測出來
百日咳桿菌為卵圓形短小桿菌，大小為0.5～1.5×0.2～0.5um，

屬鮑特氏菌屬Bordela)，無鞭毛、芽胞。革蘭氏染細(xì)菌陰性

。用甲苯胺藍(lán)染細(xì)菌可見兩極異染顆粒。專性需氧，初次分離培

養(yǎng)時營養(yǎng)要求較高，需用馬鈴薯血液甘油瓊脂培養(yǎng)基（即鮑～金

氏培養(yǎng)基）才能生長。經(jīng)37℃2～3天培養(yǎng)后，可見細(xì)小、圓形、

光滑、凸起、銀灰細(xì)菌、不透明的菌落，周圍有模糊的溶血環(huán)。

液體培養(yǎng)呈均勻混濁生長，并有少量粘性沉淀。生化反應(yīng)弱，一

般不發(fā)酵糖類，但分解蔗糖和乳糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不產(chǎn)生H2S和吲

哚，過氧化氫酶試驗陽性。
本菌常發(fā)生光滑型到粗糙的相變異：Ⅰ相為光滑型，菌落光滑，

有莢膜，毒力強；Ⅳ相為粗糙型，菌落粗糙，無莢膜，無毒力。

Ⅱ、Ⅲ相為過渡相。一般在疾病急性期分離的細(xì)菌為Ⅰ相，疾病

晚期和多次傳代培養(yǎng)可出現(xiàn)Ⅱ、Ⅲ或Ⅳ相的變異。發(fā)生這種變異

時，細(xì)菌形態(tài)、菌落、溶血性、抗原結(jié)構(gòu)和致病力等均出現(xiàn)變異

。
百日咳桿菌含有耐熱的菌體（O）抗原和不耐熱的莢膜（K）抗原

。前者為鮑特氏菌屬共同抗原，后者僅存于百日咳桿菌。
本菌抵抗力弱。56℃30分鐘、日光照射1小時可致死亡。對多粘菌

素、氯霉素、紅霉素、氨芐青霉素等敏感，對青霉素不敏感。
與致病性有關(guān)的物質(zhì)除莢膜、細(xì)胞壁脂多糖外，尚有多種生物學(xué)

活性因子。
4. available ELISA, RIA and latex agglutination test specimens of the bacteria specific

Sex antigen or PCR technology to check the bacteria nucleic acid for rapid diagnosis. [1] Nucleic acid amplification

Technology, ie, polymerase chain reaction (PCR)

The basic principle is to design and synthesize two oligonucleotides, which serve as primers and correspond to the target

Pathogen-specific microorganisms at both ends of a specific sequence, and then in vitro simulation of DNA in vivo

The process of replication is repeated amplification, the target sequence was magnified thousands or even millions of times and was seized

Measured
Bordela pertussis is a short oocyst bacillus, the size of 0.5 ~ 1.5 × 0.2 ~ 0.5um,

Bordela), flagellate, spores. Gram stain bacteria negative

. Toluidine blue staining of bacteria with bipolar heterotrophic particles. Specialized aerobic, initial isolation training

Nutritional requirements when raising high, need to use potato blood glycerol agar (ie, Bao ~ gold

Medium) to grow. After 37 ℃ 2 ~ 3 days after training, we can see small, round,

Smooth, raised, silver-gray bacteria, opaque colonies, surrounded by hazy hemolytic ring.

Liquid culture showed a uniform cloudy growth, and a small amount of viscous precipitation. Biochemical reaction is weak, one

Fermented like sugar, but the decomposition of sucrose and lactose, acid gas, do not produce H2S and indole

Indole, catalase test positive.
The bacteria often occur smooth to rough phase changes: Phase Ⅰ is smooth, colony smooth,

Capsule, virulent; Ⅳ phase is rough, rough colonies, no capsule, non-toxic.

Ⅱ, Ⅲ phase transition phase. Bacteria commonly isolated in the acute phase of disease are phase I, disease

Late and multiple subcultures can occur Ⅱ, Ⅲ or Ⅳ phase variation. This mutation occurs

When the bacteria morphology, colonies, hemolytic, antigenic structure and pathogenicity and so there are variations

.
Bordela pertussis contains a thermostable bacterial (O) antigen and a thermolabile capsular (K) antigen

. The former is a common antigen of the genusButtle, which is only found in Bordela pertussis.
The bacteria resistance is weak. 56 ℃ 30 minutes, 1 hour exposure to sunlight can cause death. To sticky bacteria

Su, chloramphenicol, erythromycin, ampicillin and other sensitive, insensitive to penicillin.
Pathogenicity associated with substances in addition to the capsule, cell wall lipopolysaccharide, there are a variety of biology

Active factor.