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Western Blot（蛋白質(zhì)印跡或者免疫印跡）技術(shù)，以蛋白質(zhì)為檢測對象，“探針”系抗體，“騷咸濕”用識認(rèn)二抗。實驗采用聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）將樣品蛋白質(zhì)分離架嘛，再轉(zhuǎn)移到固相載體（PVDF尼龍膜或者NC膜）上；固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且保持電泳分離架嘛嘅多肽類型及其生物學(xué)活性不變；然后以固相載體上嘅蛋白質(zhì)或者多肽作為抗原，與其對應(yīng)嘅抗體（一抗）發(fā)生免疫反應(yīng)，特異性一抗再同同酵素耦聯(lián)嘅第二抗體反應(yīng)，zui后喺酵素嘅作用下，導(dǎo)致底物騷咸濕或者化學(xué)發(fā)光顯影，嚟檢測電泳分離架嘛嘅特異性目的靶蛋白。
蛋白質(zhì)印跡技術(shù)結(jié)合咗凝膠電泳分力高同固相免疫測定特異性高、敏感等諸多優(yōu)點，可唔可以從復(fù)雜混合物中對特定抗原進(jìn)行鑒別同定量檢測。
試劑實驗

1. SDS-PAGE試劑。
2.勻漿緩沖液：1.0mol/L Tris-HCl（pH6.8）1.0ml；10%SDS 6.0ml；β-巰基乙醇0.2ml；ddH2O 2.8ml。
3.固相載體：PVDF尼龍膜或者NC膜（硝酸纖維素薄膜）。
4.轉(zhuǎn)膜緩沖液：甘氨酸2.9g；Tris 5.8g；SDS 0.37g；甲醇200ml；加ddH2O定容至1000ml（48mmol/L Tris.HCl，39mmol/L甘氨酸，0.037%SDS）。
5. PBS-T（pH7.4）:0.01mol/L PBS（NaCl 8.0g；KCl 0.2g；Na2HPO4 1.44g；KH2PO40.24g）；1g吐溫20，加ddH2O至1000ml。
6.膜染色液：考馬斯亮藍(lán)0.2g；甲醇80ml；醋酸2ml；ddH2O 118ml。
7.封閉液（5%脫脂奶粉，現(xiàn)襯）：脫脂奶粉1.0g溶于20ml嘅0.01mol/L PBS中。
8.騷咸濕液：化學(xué)發(fā)光劑（ECL）或者DAB 6.0mg，0.01mol/L PBS 10.0ml，鏹水鎳胺0.1ml；H2O2 1.0μl。
設(shè)備實驗

1.電泳儀
2.搖床等
實驗材料。

對量蛋白質(zhì)或者基因表達(dá)產(chǎn)物。
步驟實驗

1.蛋白質(zhì)樣品嘅制備與SDS-PAGE分離架嘛！
1）蛋白質(zhì)樣品獲得
a.細(xì)菌誘導(dǎo)表達(dá)之后，樣品一般直接用SDS凝膠加樣緩沖液裂解；
b.哺乳動物組織通常可機(jī)分散（機(jī)或者超音波室溫勻漿0.5～1min）并直接溶于SDS凝膠加樣緩沖液，然后4℃，13 000g離心15min，攞上清液作為樣品；

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