植物基因組 DNA 提取試劑盒

（Plant Genomic DNA Extraction Kit）

（適合從植物組織中提取基因組 DNA ）

試劑盒組成    50 (50 次)

Plant Genomic DNA Extraction Ki 50

2 ml Collection Tube 50

Buffer KB (Column solution) 15 ml

Buffer KBL1 (Lysis solution) 2×30 ml

Buffer KW1(Wash solution ) 50 ml

Buffer KW (Wash solution ) 使用前加入 50 mL  無(wú)水 乙醇

Buffer KE (Elution solution) 15 ml

儲(chǔ)存條件

本試劑盒在室溫（15-25 ℃）下可保存一年。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

TM Plant Genomic DNA Extraction Kit 采用*的疏水膜技術(shù)，*去除植物組織細(xì)胞中蛋白和大部分 RNA 等各種干擾物，提取高純度的DNA。試劑盒采用*的緩沖系統(tǒng)，可從絕大多數(shù)不同類型的植物包括水稻，小麥，玉米，擬南芥和大豆等植物中快速提取基因組 DNA。一般情況下，100 mg 新鮮組織的基因組 DNA 產(chǎn)量可達(dá) 5-30 μg。本試劑盒不適宜從棉花，煙草，油菜等富含多酚多糖類植物中提取總 DNA，多酚多糖類植物的提取可選用其他試劑盒 。

注意事項(xiàng)：

1.實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作 ：詳細(xì)閱讀該手冊(cè)熟悉各步驟，并準(zhǔn)備好所有的試劑盒組分、研缽、研棒、藥匙、1.5 ml 和 2 ml 滅菌離心管以及 37 ℃和 65 ℃的溫浴條件。

2.2. KBL1 和 KW1 在低溫時(shí)可能產(chǎn)生混濁或沉淀，在 37-65 ℃溫浴片刻即可。

3. Buffer KW *次使用前請(qǐng)按瓶上標(biāo)簽加入 50 ml 無(wú)水乙醇。每次使用后，請(qǐng)立即擰緊蓋子。

操作步驟：

（ 一） 平衡吸附柱

1. 取一TM Mini Column 柱裝在一個(gè) 2 ml 收集管上（已備）。加入 300 μl Buffer KB 平衡液至柱子內(nèi)，室溫 13 000 rpm 離心 1 min，使平衡液*流過(guò)柱子。棄收集管中的濾液，將空柱套回收集管內(nèi)。

注意：柱子不平衡，將導(dǎo)致 DNA  產(chǎn)率減少。

（ 二 ）樣品處理

2. 組織破碎：可根據(jù)不同樣品研磨難易程度選擇以下方法：

1）液氮研磨：將 50-100 mg 組織直接放入研缽，加入少量液氮，迅速研磨，再加少量液氮，再研磨，如此三次，將樣品研成粉末。用藥匙迅速將樣品干粉按 100 mg 組織/1000 μl KBL1 的比例加入一新的 2 ml 離心管中。加入 KBL1 后，震蕩混勻。室溫 13 000 rpm 離心 2 min。

2）直接研磨：對(duì)于新鮮植物組織，將 50-100 mg 組織直接放入研缽，按 100 mg 組織/1000 μl KBL1 比例加入 KBL1，直接在 KBL1 中將樣品研磨勻漿后，轉(zhuǎn)入 1.5 ml 離心管） （推薦）。室溫 13 000 rpm 離心 5 min。棄去沉淀，上清液待轉(zhuǎn)移。

注意：

1 ）的 上述的推薦體積為使用的 KBL1  的小體積比例。 基因組DNA  的純度取決于 KBL1  的體積和標(biāo)本的量，理論上 KBL1  的體積越大，

樣 本的量越少， DNA  質(zhì)量越好！  不同的植物組織有不同的比例，請(qǐng)?jiān)谡綄?shí)驗(yàn)前摸索。

2 ）盡量使用新鮮樣品，或者樣品取得后立即直接保存于液氮或者

-70  ℃。

（三 ）吸附

3.將上清液轉(zhuǎn)移到平衡過(guò)的吸附柱內(nèi)，室溫 13 000 rpm 離心 30 s，使裂解液*流過(guò)柱子。棄去收集管中的過(guò)濾液，把柱套回收集管中。

4.注意：

1 ）室溫太低可能造成 KBL1  混濁或沉淀，在 37  ℃ 溫浴片刻即可。

2 ）如上清液 體積過(guò)大，可以分成數(shù)次上柱，每次 不要超過(guò) 700 μl。

4. ）（可選）加入 30 μl 濃度為 20-50 μg/ml 的 RNase A 于柱的膜上，37 ℃放置 5-10 min。

注 意：本試劑盒沒(méi)有配備 RNase A  溶液。一般來(lái)說(shuō)，這一步?jīng)]有必要，因?qū)?為本試劑盒的純化柱對(duì) RNA  沒(méi)有吸附能力。如果實(shí)驗(yàn)要求不能殘留微量RNA ，可采用這一步處理 。

 ( 四 )  漂洗

5. 加入 700 μl Buffer KW1，室溫 13 000 rpm 離心 30 s，棄去收集管中的過(guò)濾液，保留柱。

6. 加入 700 μl Buffer KW，室溫 13 000 rpm 離心 30 s，棄去收集管中的過(guò)濾液，保留柱。 注意：Buffer KW  在*使用之前必須加入 50 ml  無(wú)水或95% 乙醇，并置于室溫下保存。

7.  （可選）重復(fù)用 700 μl 70%乙醇（室溫）洗滌柱子，室溫 13 000 rpm離心 1 min。（注意：用 70%乙醇漂洗有利于提高 DNA 純度）

8. 棄去收集管中的濾液，將空柱套回收集管內(nèi)。室溫下，13 000 rpm 離心 2 min 以甩干柱子基質(zhì)殘余的液體。

注意： 此步驟不可省，否則 將導(dǎo)致乙醇?xì)埩粲?DNA  中 ，影響后續(xù)反應(yīng)。

 ( 五) ) 洗 脫

9. 把柱子裝在一個(gè)新的 1.5 ml 離心管上，加入 50 μl 的 KE（可用滅菌的 TE 10 mM Tris-HCl，pH 8.0 或純水代替，純水可預(yù)先用 NaOH 調(diào) pH 值至 8.0），65 ℃放置 5-10 min，13 000 rpm 離心 1 min 以洗脫 DNA。 （也可以將 KE  預(yù)熱至 65 ℃ ，再加至膜上，可以減少放置時(shí)間至 1min ）注意：小心加 KE  到柱 中吸附膜的中間部位， 并 確保 液體 將膜全部覆蓋。

10 ．DNA 應(yīng)保存于 4 ℃，若長(zhǎng)時(shí)間保存，可凍存于-20 ℃。

本司部分DNA提取試劑盒，致電：020-8257 4011楊永漢

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